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培养基配制和灭菌指南
 培养基配制好后需要立即灭菌
培养基,是指供给微生物、植物或动物(或组织)生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。
培养基种类很多,根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基;根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基;根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等;根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、真菌培养基等。培养基配成后一般需测试并调节 pH,还须进行灭菌,通常有高温灭菌和过滤灭菌。培养基由于富含营养物质,易被污染或变质。配好后不宜久置,现配现用。
 
培养基制备过程
1.配料
配方换算→在容器中加入少量水(蒸馏水,自然水)→按照配方称取各种药品(依次加入)→加足所需水量(一药一勺,取药后立即盖上瓶盖)。
2.溶解
淀粉溶解:少量冷水调成糊状。加热溶解,特别是加有琼脂的培养基,一定要煮沸,琼脂的熔解温度
95-97℃ ,且需要边加热边搅拌以防止烧焦。
3.调 PH
用 1N 的盐酸或 1N 的 NaOH 把培养基调节到所要求的值。
4.过滤
滤纸或棉花进行过滤。(有时可以省去) [4]
5.分装
一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。
(1)三角瓶
若作静置培养,则 100ml 培养基/250ml 的三角瓶,zui多不能超过 150ml 培养基/250ml 的
三角瓶,否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞,造成染菌;若作摇瓶培养,则 15-20ml 培养基/250ml 的三角瓶,保证通气良好。
(2)试管分装
液体培养基一般装 4-5ml,约试管的 1/4 高度;固体斜面培养基一般装 3-4ml,约试管的 1/5 高度。
6.包扎
分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。
7.灭菌
按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏,培养
基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。
8.摆斜面
灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放,使其凝固成为一个斜面,约占试管长度的 1/2。
贮存
培养基在 30℃下放置一天,无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于 2-8℃冰箱中备用
培养基配制好后为什么必须立即灭菌?
大家都知道,培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型,对营养物质的要求也各不相同,加之实验和研究的目的不同,所以培养基的种类很多,使用的原料也各有差异。为了达到实验和研究的目的,要按照培养基的配方进行配制。而任何一种培养基一经制成就应及彻底灭菌,以备纯 培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。
发酵过程中,培养基灭菌主要有以下几个原因:如不灭菌,会使生物反应的基质或产物,因杂菌的消耗而损失,造成生产能力的下降;杂菌也会产生代谢产物,这 就使产物的提取更加困难,造成得率降低,产品质量下降;杂菌大量繁殖后,会改变反应液的 pH 值,使反应异常;有些杂菌会分解产物,使生产失败;如果发生噬 菌体污染,生产菌细胞将被裂解,使生产失败。
培养基灭菌是杀灭培养基中本身的原著菌或在空气中附着的杂菌,更好的让目标菌生长(减少杂菌消耗培养
基中的营养,而且有些杂菌会抑制你目标菌的生长)。一般人工培养菌基本上是尽可能让其生长快速或者产生代谢产物,因此就让其在zui适培养基上生长,以减少培养时间与提高经济效益。
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